怎樣降低elisa試劑盒實(shí)驗的誤差概率

隨著(zhù)科學(xué)技術(shù)和新興工業(yè)的發(fā)展，ELISA試劑盒對化學(xué)試劑的純度、凈度以及精密度要求愈加嚴格和專(zhuān)門(mén)化。ELISA試劑盒選擇十分重要了，主要參考以下四個(gè)方面：

一、檢測方式

   如今檢測ELISA試劑盒有許多途徑，我們可以根據自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應的可溶性產(chǎn)物，抗體上結合有相應的酶，而反應體系中添加有相應的底物。這種酶促反應生成具有特征性的顏色，可以通過(guò)分光光度計進(jìn)行檢測，堿性磷酸酶ap也是一種常用酶。酶可以結合在一抗上，也可以結合在二抗上，還可以使用鏈霉親和素標記的酶與親和素標記的一抗結合。此外ELISA結果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

二、實(shí)驗類(lèi)型

   雖然有多種類(lèi)型，不過(guò)它們都有一個(gè)共同特點(diǎn)，就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。in-cell Elisa和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)elispot是兩種特殊的類(lèi)型，in-cell Elisa需要將微孔板中培養的細胞進(jìn)行固定和通透化，然后再用抗體原位檢測。elispot有點(diǎn)像蛋白印跡western blot，先在帶膜的微孔板中培養細胞，然后在膜上檢測細胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外，我們還需要根據自身需要選擇96孔板或是48孔板進(jìn)行Elisa實(shí)驗。

三、抗體類(lèi)型

    單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于Elisa檢測，實(shí)際上有時(shí)候二者結合效果更好。例如，對于雙抗夾心法而言，用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原，隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

四、交叉反應

    如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應就會(huì )影響整個(gè)實(shí)驗的特異性。其中抗體來(lái)源所帶來(lái)的兼容性就是交叉反應的一個(gè)因素。盡管現在購買(mǎi)源自zhi定動(dòng)物的抗體越來(lái)越容易，我們仍有必要確認一下是否會(huì )產(chǎn)生交叉反應的問(wèn)題。在用雙抗夾心法進(jìn)行Elisa檢測時(shí)，檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗，而不能與捕獲抗體起反應。如果檢測用二抗與捕獲抗體結合，實(shí)驗特異性就會(huì )大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗，來(lái)避免上述問(wèn)題。