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ELISA試劑盒有哪些重要的試驗條件呢?

發(fā)布時(shí)間: 2022-08-15  點(diǎn)擊次數: 1116次
  使用ELISA試劑盒進(jìn)行試驗時(shí),應分別以陽(yáng)性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實(shí)驗結果的準確性。有時(shí)本底較高,說(shuō)明有非特異性反應。
  在ELISA中,進(jìn)行各項實(shí)驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
  固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應,觀(guān)察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
  包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時(shí),觀(guān)察陽(yáng)性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1~10μg/ml。
  ELISA試劑盒的特點(diǎn):
  一、靈敏、特異的抗體;
  二、穩定的重復性和可靠性;
  三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;
  四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類(lèi)型;
  五、節省實(shí)驗經(jīng)費。 ELISA試劑盒 回收率是反應待測物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度,損失越少,回收率越高,如果作標液1PPM,就是1毫克/升,而作出標準數據為0.99毫克/升,就是說(shuō)你的回收率是99%,這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,說(shuō)明方法的準確度。比如水中總無(wú)機氯含量測定,樣品水中含有無(wú)機氯20mg/L,取100mL被測水樣品,加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機。
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